Zmniejszona ekspresja TFF2 i zmniejszona glikozylacja αGlcNAc są złośliwymi biomarkerami gruczolaka odźwiernika dwunastnicy.

Pacjenci

W niniejszym badaniu oceniano próbki tkanek od 22 pacjentów ze szpitalem uniwersyteckim Keio z niebrodawkowymi guzami błony śluzowej dwunastnicy i różnicowaniem gruczołu odźwiernikowego. Wszystkie próbki pobrano metodą endoskopowej preparacji podśluzówkowej (ESD) i utrwalono w 10% buforowanej formalinie, a następnie zatopiono w parafinie. Rozpoznanie patologiczne gruczolaka odźwiernika (PGA) przeprowadzono na podstawie skrawków barwionych hematoksyliną i eozyną (H&E), zgodnie z kryteriami klasyfikacji WHO.²³. PGA zostało sklasyfikowane jako niskiej lub wysokiej jakości; Podsumowując, obecność wysokiego stosunku jądro/cytoplazma, wydatnych jąder, licznych mitoz, jąder sięgających do światła i/lub utraty polarności jądrowej komórek nowotworowych wskazywała na wysoki stopień raka.²⁴. Większość próbek PGA zawiera kontinuum zmian o wysokim i niskim stopniu złośliwości. Przeglądając skrawki barwione H&E, w każdym przypadku do dalszej analizy wybrano najbardziej oczywiste zmiany o niskim i/lub wysokim stopniu złośliwości. Charakterystykę kliniczną 22 przypadków PGA przedstawiono w Tabeli 1.

Tabela 1: Charakterystyka kliniczna 22 przypadków gruczolaka odźwiernika dwunastnicy.

Immunohistochemia

Barwienie immunohistochemiczne przeprowadzono przy użyciu automatycznego barwienia Bond-MAX (Leica Biosystems, Wetzlar, Niemcy). Przed barwieniem immunologicznym pobierano antygen w 10 mM buforze Tris-HCl (pH 9,0) zawierającym 1 mM EDTA. Pierwotnymi przeciwciałami stosowanymi do immunohistochemii były anty-αGlcNAc (klon HIK1083, mysie IgM, Kantokagaku, Tokio, Japonia) rozcieńczone 1/100, anty-MUC2 (klon Ccp58, mysie IgG, Novocastra, Newcastle, Wielka Brytania) rozcieńczone 1/200. -MUC2 (klon Ccp58, mysie IgG, Novocastra, Newcastle, Wielka Brytania) rozcieńczone 1/200, anty-MUC2 (klon HIK1083, mysie IgM, Kantokagaku, Tokio, Japonia) rozcieńczone 1/100, anty-MUC2 (klon Ccp58, mysie IgG , Novocastra, Newcastle, UK) rozcieńczone 1/200, anty-MUC2 (klon Ccp58, mysie IgG, Novocastra, Newcastle, UK) rozcieńczone 1/200, anty-MUC2. -MUC5AC (klon CLH2, mysie IgG, Novocastra) rozcieńczone 1/100, anty-MUC6 (klon CLH5, mysie IgG, Novocastra) rozcieńczone 1/200, anty-TFF2 (klon 2A10, Novus Biologicals, Centennial, CO, USA) 1 /2. /200, anty-p53 (klon DO-7, mysie IgG, DAKO) rozcieńczone 1/2000, anty-MIST-1 (klon D7N4B, królicze IgG; Cell Signaling Technology, Danvers, MA, USA) rozcieńczone 1/ 100, anty-pepsynogen-1 (klon 8003 (99/12), mysie IgG; Bio-Rad, Hercules, Kalifornia, USA) rozcieńczone 1/100 i anty-H⁺/K⁺-ATPaza (klon 1H9, mysie IgG; MBL, Nagoya, Japonia) rozcieńczona 1/100. Doświadczenia z kontrolą ujemną przeprowadzono poprzez pominięcie przeciwciała pierwszorzędowego w procedurze immunoprecypitacji i nie stwierdzono żadnego specyficznego barwienia.

READ Baird powiedział SEC, że przeszacował przychody przez dwa lata • TechCrunch

Przeprowadzono podwójną immunohistochemię z anty-TFF2 i anty-αGlcNAc przy użyciu automatycznego urządzenia do barwienia Bond-MAX. TFF2 wykryto za pomocą systemu opartego na peroksydazie chrzanowej DAB (ImmPress; Vector Laboratories, Burlingame, Kalifornia, USA), a αGlcNAc wykryto za pomocą Fast Red, systemu opartego na fosfatazie alkalicznej (N-Histofine Simple Stain, Nichirei Bioscience, Tokio) . . , Japonia).

Półkwantyfikacja podstawowego białka miozyny, αGlcNAc, TFF2, MIST-1, pepsonigenu-1 i H⁺/K⁺-Wyrażenie ATPazy

Ocenę ekspresji białek rdzeniowych mucyny, αGlcNAc i TFF2 przeprowadzono w oparciu o stosunek dodatnio wybarwionych komórek nowotworowych do całkowitej liczby komórek nowotworowych w każdej zmianie PGA o niskim lub wysokim stopniu złośliwości, a następnie sklasyfikowano w skali od 0 do 3, gdzie 0 oznacza <10% komórek nowotworowych.; 1 reprezentuje 11-33% komórek nowotworowych; 2 reprezentuje 33-66% komórek nowotworowych; a 3 reprezentuje ponad 66% komórek nowotworowych, jak opisano wcześniej^14,15,16. Następnie obliczono stosunek αGlcNAc lub TFF2 do MUC6 dla wszystkich 40 zmian.

Wyniki barwienia p53 sklasyfikowano jako rozproszone, dzikie i utratę ekspresji. Wzorzec typu dzikiego charakteryzuje się słabą, niejednorodną ekspresją.

MIST-1, pepsynogen-1 i H⁺/K⁺-Ekspresję ATPazy oceniano na podstawie stosunku dodatnio wybarwionych komórek nowotworowych do całkowitej liczby komórek nowotworowych we wszystkich zmianach PGA, w tym małych i wysokich, a następnie oceniano od 0 do 3, jak opisano wcześniej.^14,15,16.

Statystyka

Półilościowe wyniki ekspresji dla każdego markera mucyny MUC5AC, MUC6, αGlcNAc i TFF2 analizowano statystycznie przy użyciu testu dopasowanych części Wilcoxona. Analizowano także różnicę w stosunkach stopnia ekspresji TFF2 lub αGlcNAc do MUC6 pomiędzy zmianami PGA o wysokim i niskim stopniu złośliwości. S Za istotne statystycznie uznano wartości <0,05. Wszystkie analizy przeprowadzono przy użyciu programu Microsoft Office Excel 2007 (Microsoft Corporation, Redmond, WA, USA). Wykresy skrzypiec wygenerowano przy użyciu oprogramowania JMP (JMP Statistical Discovery LLC, Cary, NC, USA).

READ W 2023 r. wydałem ponad 6500 USD na szkolenia — oto 5 zasad, których nauczyłem się na temat budowania biznesu internetowego | Autor: Curtis Bikes | Strona główna | Listopad 2023

Zatwierdzenie etyczne

Badanie zostało przeprowadzone zgodnie z Deklaracją Helsińską i uzyskało zgodę komisji etycznych Keio University School of Medicine w Tokio, Japonia (nr 20180074). Od wszystkich pacjentów uzyskano pisemną świadomą zgodę.

Henryk Sienkiewicz

Henryk Sienkiewicz jest współpracownikiem Appki.com.pl i zajmuje się tematami związanymi z aktualnościami, polityką, biznesem, technologią, sportem, rozrywką oraz stylem życia. Koncentruje się na rzetelnym przekazywaniu informacji, bieżących wydarzeniach i tematach ważnych dla czytelników. Jego artykuły przedstawiają istotne wiadomości i trendy w sposób przejrzysty, zrozumiały i przyjazny dla odbiorców.